ภาพขั้นตอนการตรวจเชื้อไวรัส ตัวแดงดวงขาว ด้วยเทคนิค พีซีอาร์
ความหมาย และความเป็นมาของ พีซีอาร์
หลายท่านในวงการกุ้งคงเคยได้ยินคำว่า "ตรวจตัวแดง" หรือ "ตรวจ พีซีอาร์" สงสัยมั๊ยครับว่า ความหมายคืออะไร? และตรวจกันอย่างไร? เนื้อหาและภาพถ่ายที่ผมได้รับอนุญาตให้เข้าบันทึกภาพ คงช่วยตอบคำถามเหล่านี้ได้ครับ แต่ผมคงไม่ลงลึกในรายละเอียดทางวิชาการมากนัก เพราะ เนื้อหาจะเยอะมาก และผมจะพยายามใช้คำศัพท์ที่ง่ายๆ ครับ หากนักวิชาการท่านใดเห็นว่ามีข้อผิดพลาด กรุณาส่งเมล์มาแจ้งด้วยนะครับ จะขอบพระคุณยิ่ง (เว็บมาสเตอร์)
การตรวจไวรัส ตัวแดงดวงขาว ทำโดยการครวจสารพันธุกรรม ดีเอ็นเอ หรือ DNA (deoxyribonucleic acid) คงเคยได้ยินชื่อกันนะครับ แบบที่หาการเป็นพ่อ แม่ ลูก นะครับ แต่สมัยก่อนทำยากเพราะ DNA ที่สกัดได้มีจำนวนน้อยมาก
จนกระทั่งในปี พ.ศ. 2528 ดอกเตอร์ Kary Mullis ได้เสนอผลงานวิจัยเกี่ยวกับ "การเพิ่มสารพันธุกรรม หรือ DNA ในหลอดทดลอง" ด้วยปฏิกริยา Polymerase Chain Reaction หรือ PCR ที่สามารถเพิ่มปริมาณ ดีเอ็นเอ ได้เป็นล้านเท่า ทำให้การครวจสารพันธุกรรม ดีเอ็นเอ ทำได้ง่ายขึ้น (ภายหลัง ดอกเตอร์ท่านนี้ได้รางวัล โนเบล ด้วยครับ) และการนำ พีซีอาร์ มาใช้ก็เริ่มในปี พ.ศ. 2530
ปัจจุบัน เทคนิคด้าน พีซีอาร์ ก้าวหน้าและพัฒนามากขึ้นและมีหลายแบบ ลองมาชมวิธีที่ น้องๆ ห้อง พีซีอาร์ ของศูนย์วิจัยและพัฒนาประมงชายฝั่งจันทบุรี ใช้อยู่ครับ
1. ทำให้ ดีเอ็นเอ ออกจากตัวอย่างกุ้งมาอยู่ในน้ำ
2. การสกัด ดีเอ็นเอ ด้วย ไอโซโคด สติ๊ก
3. การทำดีเอ็นเอต้นแบบ (ดีเอ็นเอเทมเพลท)
4. การเพิ่มจำนวนดีเอ็นเอ(ต้นแบบ) ด้วยเทคนิคพีซีอาร์
ผสมค๊อกเทล (ไม่ใช่เหล้านะครับ) ที่สำคัญ ได้แก่ PCR Buffer Solution, dNTP mixture, Primer, Tag DNA Polymerase ได้ปริมาตรรวม 45 ไมโครลิตร ใส่หลอดใหม่
จากนั้นดูด ดีเอ็นเอต้นแบบ (ดีเอ็นเอเทมเพลท) ที่ได้จากข้างบน ผสมลงไป 5 ไมโครลิตร (ค๊อกเทลจะมีส่วนช่วยในการเพิ่มปริมาณ ดีเอ็นเอ)
5. การวิเคราะห์ ดีเอ็นเอ ด้วยวิธี Agarose Gel Electrophoresis
6. การอ่านผลจากแถบการเคลื่อนที่ของ ดีเอ็นเอ ด้วยแสงยูวี
